Hur man förbereder medium för vävnadsodling av växter hemma
Odlingsmedium för växtodling i vävnadskultur ger växterna allt de normalt skulle få från jord, rötter och sin omgivning. Ett typiskt medium innehåller mineralnäringsämnen, vitaminer, socker, vatten och ett gelbildande ämne. Beroende på odlingens syfte kan det också innehålla växttillväxtreglerande ämnen. Det är viktigt att tillreda mediet korrekt eftersom även små skillnader i koncentration eller pH kan påverka växtens utveckling.
De grundläggande komponenterna
Basala salter
Ett av de mest använda basala medierna är Murashige och Skoog-medium, som vanligtvis kallas MS-medium. MS tillför viktiga makro- och mikronäringsämnen, däribland kväve, kalium, kalcium, magnesium, fosfor, järn och spårelement. Många kommersiella formuleringar innehåller även vitaminer.
Sackaros
Växter som växer i odlingskärl kan ofta inte förlita sig helt på fotosyntes. Sackaros ger en lättillgänglig energikälla. En koncentration på omkring 20–30 g/L är vanlig i många protokoll, även om den optimala koncentrationen varierar beroende på art och odlingsstadium.
Agar
Agar förvandlar det flytande mediet till en halvfast gelé. Detta ger stöd åt växtbiten samtidigt som näringsämnen och vatten förblir tillgängliga. Den mängd som behövs beror på styrkan hos den agar som används.
Växttillväxtreglerande ämnen
Växttillväxtreglerande ämnen (PGR) såsom BAP, NAA och IBA kan inkluderas för att påverka skottbildning, förökning eller rotbildning. De används i mycket låga koncentrationer och bör avvägas noggrant.
Vilken typ av vatten bör användas?
För konsekventa resultat är destillerat, dejoniserat eller omvändosmosvatten att föredra. Kranvatten kan innehålla varierande mängder kalcium, magnesium, bikarbonat, natrium och andra lösta mineraler. Dessa mineraler förändrar mediets slutliga sammansättning. Mjukt kranvatten kan fungera i vissa situationer, men renat vatten ger bättre reproducerbarhet.
Tillredning av mediet
Börja med något mindre vatten än den önskade slutvolymen.
- Lös upp de basala salterna och sackarosen helt.
- Tillsätt eventuella andra komponenter som krävs enligt formuleringen (d.v.s. PGR och konserveringsmedel).
- Justera pH-värdet innan agar tillsätts om det är den metod som används i ditt protokoll.
- Ett pH-värde på omkring 5,6–5,8 används vanligtvis för många växtvävnadskulturer.
- Efter pH-justering, fyll på med vatten till slutvolymen.
- Tillsätt den erforderliga agarn och fördela mediet i odlingskärl.
- Sterilisera i autoklav eller tryckkokare i 15 minuter vid 15 PSI och låt det svalna innan inokulering.
Sterilisering
Det tillredda mediet måste steriliseras innan växtmaterialet tillsätts. Autoklav är den standardiserade laboratoriemetoden. För vävnadskultur hemma används vanligtvis en lämplig tryckkokare för att uppnå jämförbara förhållanden för fuktigvärmesterilisering. Efter sterilisering får kärlen svalna utan att öppnas.
Varför pH-värdet är viktigt
Mediets pH-värde påverkar:
- tillgängligheten av näringsämnen
- agarens konsistens
- den kemiska stabiliteten
- växtens tillväxt
Extremt högt eller lågt pH kan göra vissa näringsämnen mindre tillgängliga eller påverka hur mediet stelnar.
Undvik vanliga misstag
Vanliga problem vid tillredning inkluderar:
- felaktig avvägning
- felaktig slutvolym
- att man glömmer att justera pH-värdet
- att man använder för mycket eller för lite agar
- att mediet kontamineras efter sterilisering
- att man förväxlar mg med g
- att man tillsätter koncentrerade PGR felaktigt
För mycket små mängder kan moderlösningar göra noggrann dosering mycket enklare.
Konsekvens är viktigare än perfektion
En stor fördel med vävnadskultur är dess reproducerbarhet. När varje sats tillreds på samma sätt blir det mycket lättare att avgöra om förändringar i växtens tillväxt beror på växten själv eller på mediet. Bra anteckningar är därför lika värdefulla som bra ingredienser.
