Hur man förbereder medium för vävnadsodling av växter hemma
Vävnadsodlingsmedium ger växter allt de normalt skulle få från jord, rötter och sin omgivning. Ett typiskt medium innehåller mineralnäringsämnen, vitaminer, socker, vatten och ett gelningsmedel. Beroende på syftet med odlingen kan det även innehålla växttillväxtreglerare. Att förbereda medier korrekt är viktigt eftersom även små skillnader i koncentration eller pH kan påverka växtens utveckling.
Grundläggande komponenter
Basalsalter
Ett av de mest använda basalmedierna är Murashige and Skoog-medium, allmänt kallat MS-medium. MS tillhandahåller viktiga makro- och mikronäringsämnen, inklusive kväve, kalium, kalcium, magnesium, fosfor, järn och spårämnen. Många kommersiella formuleringar innehåller även vitaminer.
Sackaros
Växter som växer i odlingskärl kan ofta inte förlita sig helt på fotosyntes. Sackaros ger en lättillgänglig energikälla. En koncentration på cirka 20–30 g/l är vanlig i många protokoll, även om den ideala koncentrationen varierar beroende på art och odlingsstadium.
Agar
Agar omvandlar flytande medium till en halvfast gel. Detta ger stöd åt explantatet samtidigt som näringsämnen och vatten förblir tillgängliga. Mängden som krävs beror på styrkan hos den agar som används.
Växttillväxtreglerare
Växttillväxtreglerare (PGR) som BAP, NAA och IBA kan inkluderas för att påverka skottbildning, förökning eller rotbildning. De används i mycket låga koncentrationer och bör mätas noggrant.
Vilken typ av vatten bör användas?
För konsekventa resultat är destillerat, avjoniserat eller omvänd osmos-vatten att föredra. Kranvatten kan innehålla varierande mängder kalcium, magnesium, bikarbonat, natrium och andra lösta mineraler. Dessa mineraler förändrar mediets slutgiltiga sammansättning. Mjukt kranvatten kan fungera i vissa situationer, men renat vatten ger bättre reproducerbarhet.
Förberedelse av mediet
Börja med något mindre vatten än den slutgiltiga önskade volymen.
- Lös upp basalsalterna och sackarosen noggrant.
- Tillsätt eventuella andra komponenter som krävs enligt formuleringen (t.ex. PGR och konserveringsmedel).
- Justera pH-värdet innan agar tillsätts, om detta är metoden som används i ditt protokoll.
- Ett pH-värde på cirka 5,6–5,8 används vanligtvis för många växtvävnadsodlingar.
- Efter pH-justering, fyll upp lösningen till den slutgiltiga volymen.
- Tillsätt den nödvändiga mängden agar och fördela mediet i odlingskärlen.
- Sterilisera i autoklav eller tryckkokare i 15 minuter vid 15 PSI och låt svalna före inokulering.
Sterilisering
Förberett medium måste steriliseras innan växtmaterial introduceras. En autoklav är standardmetoden i laboratorier. För vävnadsodling i hemmet används vanligtvis en lämplig tryckkokare för att uppnå jämförbara förhållanden för fuktig värmesterilisering. Låt kärlen svalna efter sterilisering utan att öppna dem.
Varför pH är viktigt
Mediets pH-värde påverkar:
- näringstillgänglighet
- agarens konsistens
- kemisk stabilitet
- växttillväxt
Extremt högt eller lågt pH kan göra vissa näringsämnen mindre tillgängliga eller påverka hur mediet stelnar.
Undvik vanliga misstag
Vanliga problem vid förberedelse inkluderar:
- felaktig vägning
- felaktig slutvolym
- att glömma att justera pH
- att använda för mycket eller för lite agar
- kontaminering av mediet efter sterilisering
- att förväxla mg med g
- felaktig tillsättning av koncentrerade PGR
För mycket små mängder kan stamalösningar göra doseringen betydligt enklare.
Konsekvens är viktigare än perfektion
En stor fördel med vävnadsodling är repeterbarhet. När varje batch förbereds på samma sätt blir det mycket enklare att avgöra om förändringar i växttillväxt orsakas av själva växten eller av mediet. Bra anteckningar är därför lika värdefulla som bra ingredienser.