Etablerings-, formerings- og rotingsmedier forklart
Plantecellekultur utføres sjelden i ett medium fra start til slutt. I stedet går kulturer ofte gjennom flere stadier, hver med et eget biologisk mål.
Tre av de viktigste er etablering, multiplikasjon og rotfelling. Å forstå disse stadiene gjør cellekulturen mye enklere å håndtere.
Stadium 1: Etablering
Etablering begynner når den opprinnelige eksplanten føres inn i en steril kultur.
På dette tidspunktet er hovedmålene enkle:
- holde vevet i live
- oppnå en kontamineringsfri kultur
- fremme stabil vekst
- la eksplanten hente seg inn etter sterilisering
Friske eksplanter har ofte vært utsatt for betydelig stress. Blader kan ha blitt fjernet, vev har blitt skåret, og planten har gjennomgått kjemisk overflatesterilisering. Av denne grunnen er etablering ikke nødvendigvis tiden for å maksimere skuddmultiplikasjon. En vellykket etableringskultur er rett og slett en som forblir ren og begynner å produsere sunn ny vekst.
Stadium 2: Multiplikasjon
Når en kultur er stabil, endres målet. I stedet for å opprettholde ett skudd, ønsker dyrkeren å produsere flere. Multiplikasjonsmedier inneholder ofte en sterkere cytokininpåvirkning. Cytokininer oppmuntrer eksisterende knopper til å aktiveres og kan fremme utviklingen av flere skudd. Etter at nok skudd har utviklet seg, kan kulturen deles og overføres til friskt multiplikasjonsmedium. Denne prosessen kalles subkulturering. Gjentatt subkulturering kan forvandle én vellykket eksplante til mange individuelle småplanter.
Når bør kulturer subkultureres?
Kulturer bør ikke forbli på det samme mediet i ubestemt tid.
Over tid:
- næringsstoffer forbrukes
- sukkeret tømmes
- agaren kan tørke
- avfallsprodukter akkumuleres
- eksponeringen for vekstregulerende stoffer fortsetter
Det ideelle intervallet avhenger av arten og vekstraten. I stedet for å følge kalenderen alene, observer plantene. Sunne, aktivt voksende skudd er generelt bedre kandidater for subkulturering enn svakt eller stresset vev.
Stadium 3: Rotfelling
Et skudd produsert under multiplikasjon er ikke automatisk klart for å forlate cellekulturen. Det trenger vanligvis et funksjonelt rotsystem. Under rotfelling endres hormonbalansen for å fremme rotinitiering og rotlengdevekst. Auxiner som IBA brukes ofte til dette formålet. Målet er ikke lenger å skape så mange skudd som mulig. I stedet er målet å produsere en sterk, individuell småplante som er i stand til å overleve utenfor kulturbeholderen.
Hvorfor ikke bruke ett medium til alt?
Et medium som produserer utmerket multiplikasjon kan hemme rotfelling. Et medium optimalisert for rotfelling kan produsere svært lite skuddmultiplikasjon. Plantens utvikling endres avhengig av næringskonsentrasjon, sukkerkonsentrasjon og hormonbalanse. Ved å bruke separate stadier kan dyrkeren kontrollere disse utviklingssignalene.
En nyttig måte å tenke på systemet på er:
Etablering → Overleve og bli ren
Multiplikasjon → Produsere flere skudd
Rotfelling → Bygge en uavhengig plante
Akklimatisering → Tilpasse seg normale vekstforhold
Den rekkefølgen er en av de grunnleggende ideene bak mikroforplantning.
