Hvordan sterilisere planteksplantater for vevskultur
Planteekplanten er vanligvis den største kilden til kontaminering når man etablerer en ny vevskultur. Planter bærer naturlig bakterier, soppsporer og andre mikroorganismer på overflaten. Formålet med sterilisering av ekplanten er å redusere disse mikroorganismene nok til at plantevevet kan vokse uten kontaminering. Vanskeligheten er at steriliseringsbehandlingen må drepe mikrober uten å drepe planten.
Start med sunt plantemateriale
Steriliseringen begynner før ekplanten kommer inn i det sterile arbeidsområdet. En sunn morplante gir bedre startmateriale enn en stresset eller syk plante.
Velg alltid så langt det er mulig:
- aktivt voksende vev
- unge skudd
- materiale fritt for skadedyr
- materiale uten synlig råte
- vev dyrket bort fra jordkontaminering
Underjordiske strukturer som røtter, rotstengler og knoller er generelt vanskeligere å sterilisere.
Rengjøring er ikke det samme som sterilisering
Fjern så mye fysisk kontaminering som mulig før kjemisk behandling.
Plantemateriale kan vaskes grundig med vann og renses for:
- jord
- dødt vev
- organisk rusk
- gamle bladskjørt
Ved å fjerne dette materialet blir det påfølgende steriliseringssteget mer effektivt.
Overflatesterilisering
Vanlige steriliseringsmidler i plantevevskulturer inkluderer etanol og natriumhypokloritt. Etanol kan raskt redusere overflatebakterier, mens fortynnede løsninger av natriumhypokloritt (d.v.s. blekemiddel) gir en lengre desinfiserende behandling. Den riktige styrken og eksponeringstiden avhenger i stor grad av ekplanten. Mykt meristemvev kan bli skadet av en behandling som en tykk, treaktig stilk toler lett. Dette er grunnen til at steriliseringsprotokoller bør behandles som utgangspunkter snarere enn universelle oppskrifter.
Steril skylling
Etter kjemisk sterilisering overføres ekplanten til det sterile arbeidsområdet. Restene av desinfeksjonsmiddelet fjernes ved hjelp av sterilt vann. Flere skyllinger brukes ofte for å redusere kjemiske rester.
Beskjæring etter sterilisering
De ytre overflatene av ekplanten er vanligvis mest utsatt for både kontaminanter og steriliseringskjemikalier. Når den er inne i det sterile arbeidsområdet, kan skadet ytre vev fjernes med sterile instrumenter. For skuddspisser kan bladskjørt fjernes gradvis til renere indre vev blottlegges. For knuter kan endene av stilken beskjæres på nytt før inokulering.
Ekplantens størrelse har betydning
Veldig store ekplanten kan bære mer kontaminering. Ekstremt små ekplanten kan være vanskelige å etablere fordi de inneholder færre lagrede ressurser og skades lettere. For hobbyvevskultur gir det ofte en praktisk balanse å beholde en liten mengde sunt vev rundt meristemet.
Forskjellige planter krever forskjellige strategier
En steriliseringsmetode som fungerer godt for Monstera, fungerer kanskje ikke like godt for en orkidé eller en Alocasia-knolle.
Faktorer som påvirker sterilisering inkluderer:
- vevtykkelse
- overflatestruktur
- tilstedeværelse av hår
- om vevet vokste under jorden
- ekplantens alder
- naturlig mikrobiell belastning
De beste protokollene utvikles vanligvis gjennom gjentatte forsøk.
Før protokoll
Hver gang du etablerer en ny art, registrer den nøyaktige behandlingen.
Merk:
- rengjøringsmetode
- desinfeksjonsmiddelkonsentrasjon
- eksponeringstid
- antall skyllinger
- ekplanttype
- overlevelse
- kontamineringsrate
Hvis de fleste kulturene blir kontaminert, må behandlingen kanskje gjøres sterkere.
Hvis de fleste ekplantene dør, men forblir rene, kan behandlingen være for tøff.
Målet er ikke maksimal sterilisering.
Målet er maksimal ren overlevelse.
