Hvordan tilberede vekstmedium for plantevevskultur hjemme
Vekstmedium for vevdyrking gir plantene alt de normalt ville fått fra jord, røtter og omgivelsene rundt. Et typisk medium inneholder mineralnæringsstoffer, vitaminer, sukker, vann og et geledannende middel. Avhengig av formålet med dyrkingen kan det også inneholde planteveksthormoner. Det er viktig å tilberede mediet riktig, fordi selv små forskjeller i konsentrasjon eller pH kan påvirke plantenes utvikling.
De grunnleggende komponentene
Basissalter
Et av de mest brukte basismediene er Murashige og Skoog-medium, som ofte kalles MS-medium. MS tilfører viktige makro- og mikronæringsstoffer, inkludert nitrogen, kalium, kalsium, magnesium, fosfor, jern og sporstoffer. Mange kommersielle formuleringer inneholder også vitaminer.
Sukrose
Planter som vokser i dyrkingsbeholdere, kan ofte ikke stole utelukkende på fotosyntese. Sukrose gir en lett tilgjengelig energikilde. En konsentrasjon på rundt 20–30 g/L er vanlig i mange protokoller, selv om den ideelle konsentrasjonen varierer avhengig av art og dyrkingsstadium.
Agar
Agar gjør det flytende mediet om til en halvfast gelé. Dette støtter eksplanten samtidig som næringsstoffer og vann forblir tilgjengelige. Mengden som kreves, avhenger av styrken på agaren som brukes.
Planteveksthormoner
PGR-er som BAP, NAA og IBA kan inkluderes for å påvirke skuddannelse, multiplikasjon eller rotutvikling. De brukes i svært lave konsentrasjoner og må måles nøyaktig.
Hvilken type vann bør brukes?
For konsekvente resultater er det foretrukket å bruke destillert, deionisert eller omvendt osmosevann. Kranvann kan inneholde varierende mengder kalsium, magnesium, bikarbonat, natrium og andre oppløste mineraler. Disse mineralene endrer den endelige sammensetningen av mediet. Mykt kranvann kan fungere i noen situasjoner, men renset vann gir bedre reproduserbarhet.
Tilberedelse av mediet
Start med litt mindre vann enn det endelige ønskede volumet.
- Løs opp basissaltene og sukrosen grundig.
- Tilsett eventuelle andre komponenter som kreves i formuleringen (d.v.s. PGR-er & konserveringsmidler)
- Juster pH før du tilsetter agar, hvis dette er metoden som brukes i protokollen din.
- En pH på rundt 5,6–5,8 brukes vanligvis for mange plantevevdyrkinger.
- Etter pH-justering, fyller du opp løsningen til det endelige volumet.
- Tilsett den nødvendige agaren og fordel mediet i dyrkingsbeholdere.
- Steriliser i autoklav eller trykkoker i 15 minutt ved 15 PSI, og la det kjøle seg ned før inokulering.
Sterilisering
Det tilberedte mediet må steriliseres før plantematerialet tilsettes. Autoklav er standardmetoden i laboratoriet. For vevdyrking hjemme brukes det ofte en egnet trykkoker for å oppnå sammenlignbare forhold for fuktighetssterilisering. Etter sterilisering lar du beholderne kjøle seg ned uten å åpne dem.
Hvorfor pH er viktig
pH-verdien til mediet påvirker:
- tilgjengeligheten av næringsstoffer
- agarens konsistens
- kjemisk stabilitet
- plantevekst
Ekstremt høy eller lav pH kan gjøre noen næringsstoffer mindre tilgjengelige eller påvirke hvordan mediet størkner.
Unngå vanlige feil
Vanlige problemer ved tilberedelse inkluderer:
- unøyaktig veiing
- feil endelig volum
- glemsel om å justere pH
- bruk av for mye eller for lite agar
- kontaminering av mediet etter sterilisering
- forveksling av mg med g
- unøyaktig tilsetning av konsentrerte PGR-er
For svært små mengder kan standardløsninger gjøre nøyaktig dosering mye enklere.
Konsekvens er viktigere enn perfeksjon
En stor fordel med vevdyrking er gjentakbarhet. Når hver batch tilberedes på samme måte, blir det mye enklere å avgjøre om endringer i planteveksten skyldes planten selv eller mediet. Gode logger er derfor like verdifulle som gode ingredienser.
