Pourquoi les plantes issues de culture tissulaire brunissent, deviennent vitreuses ou cessent de croître
Tous les problèmes de culture in vitro ne sont pas dus à une contamination. Les plantes peuvent rester parfaitement stériles tout en se développant mal. Le brunissement, les tissus vitreux, les feuilles jaunes et la croissance stagnante sont des symptômes courants qui peuvent fournir des indices sur ce qui se passe à l’intérieur du flacon de culture.
Brunissement
Les tissus végétaux fraîchement coupés peuvent libérer des composés phénoliques. Lorsque ces composés s’oxydent, l’explant et le milieu environnant peuvent brunir. Certaines espèces produisent beaucoup plus de matières phénoliques que d’autres. Une oxydation sévère peut endommager les tissus et finir par tuer l’explant.
Le brunissement peut s’accentuer après :
- une coupe agressive
- une stérilisation intense
- une blessure des tissus
- un stress prolongé
Réduire les dommages inutiles causés aux tissus et transférer les explants affectés dans un milieu frais peut parfois aider.
Hyperhydricité
L’hyperhydricité est souvent décrite comme une croissance vitreuse, aqueuse ou translucide. Les pousses affectées peuvent paraître gonflées et anormalement molles. Les feuilles peuvent devenir épaisses, cassantes ou malformées.
L’hyperhydricité peut être associée à :
- une concentration excessive en cytokinines
- un mauvais échange gazeux
- une humidité très élevée
- un milieu trop humide
- une faible concentration d’agar
- certaines conditions nutritionnelles
Réduire l’exposition aux cytokinines ou améliorer les conditions physiques de la culture peut parfois favoriser un meilleur développement ultérieur.
Feuilles jaunes
Le jaunissement peut indiquer plusieurs problèmes différents. Parmi les causes possibles figurent :
- un déséquilibre nutritionnel
- une dégradation de la qualité du milieu
- une concentration excessive en sels
- un pH inadapté
- le vieillissement des feuilles
- un stress lumineux
- une mauvaise fonction racinaire
La répartition du jaunissement est souvent plus révélatrice que le symptôme seul.
Pousses restant très petites
Des taux de multiplication élevés ne sont pas toujours souhaitables. Une forte exposition aux cytokinines peut produire de nombreuses pousses minuscules qui ne parviennent pas à s’allonger. Si les pousses restent extrêmement compactes, réduire la concentration en cytokinines lors du prochain sous-culture peut les aider à se développer plus normalement.
Cultures qui cessent de croître
La croissance peut ralentir lorsque le milieu s’épuise ou lorsque la plante est restée trop longtemps dans le même flacon. D’autres possibilités incluent :
- un équilibre hormonal inapproprié
- une concentration inadaptée en sels de base
- un manque de lumière
- une température trop basse
- un stress physiologique
- une contamination latente
Une sous-culture fraîche peut souvent aider à déterminer si le problème vient du milieu ancien.
Un symptôme peut avoir plusieurs causes
Le dépannage en culture in vitro est rarement aussi simple que :
« Brun = un problème spécifique. »
Au lieu de cela, examinez plusieurs variables ensemble.
Demandez-vous :
- Quand le symptôme a-t-il commencé ?
- Est-il apparu immédiatement après l’inoculation ?
- Toutes les cultures sont-elles affectées ?
- Quelque chose a-t-il été modifié lors du dernier lot ?
- Le milieu est-il le même ?
- La température est-elle stable ?
- Les autres cultures se développent-elles normalement ?
Un bon dépannage consiste essentiellement à mener une expérimentation contrôlée. Modifiez un seul paramètre, observez la réaction et tenez des registres.
