Explicación de los medios de establecimiento, multiplicación y enraizamiento
El cultivo de tejidos vegetales rara vez se realiza en un solo medio de principio a fin. En cambio, los cultivos suelen pasar por varias etapas, cada una con un objetivo biológico diferente.
Tres de las más importantes son el establecimiento, la multiplicación y el enraizamiento. Comprender estas etapas facilita mucho el manejo del cultivo de tejidos.
Etapa 1: Establecimiento
El establecimiento comienza cuando se introduce el explante original en un cultivo estéril.
En este punto, los objetivos principales son sencillos:
- mantener vivo el tejido
- obtener un cultivo libre de contaminación
- fomentar un crecimiento estable
- permitir que el explante se recupere de la esterilización
Los explantes frescos a menudo han experimentado un estrés considerable. Se les puede haber retirado hojas, cortado el tejido y sometido a una esterilización química superficial. Por esta razón, el establecimiento no es necesariamente el momento de maximizar la multiplicación de brotes. Un cultivo de establecimiento exitoso es simplemente aquel que se mantiene limpio y comienza a producir nuevo crecimiento sano.
Etapa 2: Multiplicación
Una vez que el cultivo es estable, el objetivo cambia. En lugar de mantener un solo brote, el cultivador desea producir varios. Los medios de multiplicación suelen contener una mayor concentración de citoquininas. Las citoquininas estimulan la activación de las yemas existentes y pueden favorecer el desarrollo de brotes adicionales. Después de que se desarrollen suficientes brotes, el cultivo puede dividirse y transferirse a un medio de multiplicación fresco. Este proceso se denomina subcultivo. El subcultivo repetido puede convertir un explante exitoso en muchas plántulas individuales.
¿Cuándo se deben subcultivar los cultivos?
Los cultivos no deben permanecer indefinidamente en el mismo medio.
Con el tiempo:
- se agotan los nutrientes
- se agota el azúcar
- el agar puede secarse
- se acumulan productos de desecho
- continúa la exposición a reguladores de crecimiento vegetal (RGP)
El intervalo ideal depende de la especie y de la tasa de crecimiento. En lugar de seguir únicamente el calendario, observe las plantas. Los brotes sanos y en crecimiento activo suelen ser mejores candidatos para el subcultivo que los tejidos débiles o estresados.
Etapa 3: Enraizamiento
Un brote producido durante la multiplicación no está automáticamente listo para salir del cultivo de tejidos. Por lo general, necesita un sistema radicular funcional. Durante el enraizamiento, se modifica el equilibrio hormonal para favorecer la iniciación y elongación de las raíces. Las auxinas, como la IBA, se utilizan con frecuencia para este propósito. El objetivo ya no es crear tantos brotes como sea posible. En cambio, el objetivo es producir una plántula individual fuerte capaz de sobrevivir fuera del recipiente de cultivo.
¿Por qué no usar un solo medio para todo?
Un medio que produce una excelente multiplicación puede inhibir el enraizamiento. Un medio optimizado para el enraizamiento puede producir muy poca multiplicación de brotes. El desarrollo de las plantas cambia según la concentración de nutrientes, la concentración de azúcar y el equilibrio hormonal. El uso de etapas separadas permite al cultivador controlar esas señales de desarrollo.
Una forma útil de pensar en el sistema es:
Establecimiento → Sobrevivir y mantenerse limpio
Multiplicación → Producir más brotes
Enraizamiento → Formar una planta independiente
Aclimatación → Adaptarse a las condiciones normales de cultivo
Esa secuencia es una de las ideas fundamentales detrás de la micropropagación.
