Cómo esterilizar explantes vegetales para cultivo de tejidos
El explante vegetal suele ser la principal fuente de contaminación al establecer un nuevo cultivo de tejidos. Las plantas portan naturalmente bacterias, esporas de hongos y otros microorganismos en sus superficies. El objetivo de la esterilización del explante es reducir esos microorganismos lo suficiente para que el tejido vegetal crezca sin contaminación. La dificultad radica en que el tratamiento esterilizante debe eliminar los microbios sin matar la planta.
Comience con material vegetal sano
La esterilización comienza antes de que el explante entre en el espacio de trabajo estéril. Una planta madre sana proporciona un mejor material de partida que una planta estresada o enferma.
Siempre que sea posible, elija:
- tejido en crecimiento activo
- brotes jóvenes
- material libre de plagas
- material sin podredumbre visible
- tejido cultivado lejos de la contaminación del suelo
Las estructuras subterráneas como raíces, rizomas y bulbos son generalmente más difíciles de esterilizar.
La limpieza no es lo mismo que la esterilización
Antes del tratamiento químico, elimine tanta contaminación física como sea posible.
El material vegetal puede lavarse a fondo con agua y limpiarse de:
- tierra
- tejido muerto
- restos orgánicos
- vainas foliares viejas
Eliminar este material hace que el siguiente paso de esterilización sea más eficaz.
Esterilización superficial
Los agentes esterilizantes comunes en el cultivo de tejidos vegetales incluyen el etanol y el hipoclorito de sodio. El etanol puede reducir rápidamente los microorganismos superficiales, mientras que las soluciones diluidas de hipoclorito de sodio (es decir, lejía) proporcionan un tratamiento desinfectante más prolongado. La concentración y el tiempo de exposición correctos dependen en gran medida del explante. El tejido meristemático blando puede dañarse con un tratamiento que un tallo leñoso grueso tolera fácilmente. Por eso, los protocolos de esterilización deben considerarse como puntos de partida en lugar de recetas universales.
Enjuague estéril
Después de la esterilización química, el explante se transfiere al espacio de trabajo estéril. El desinfectante residual se elimina utilizando agua estéril. Comúnmente se utilizan múltiples enjuagues para reducir los residuos químicos.
Recorte después de la esterilización
Las superficies exteriores del explante suelen ser las más expuestas tanto a los contaminantes como a los productos químicos esterilizantes. Una vez dentro del espacio de trabajo estéril, el tejido exterior dañado puede eliminarse con instrumentos estériles. En el caso de los ápices de los brotes, las vainas foliares pueden retirarse gradualmente hasta exponer un tejido interno más limpio. Para los nudos, los extremos del tallo pueden recortarse de nuevo antes de la inoculación.
El tamaño del explante importa
Los explantes muy grandes pueden portar más contaminación. Los explantes extremadamente pequeños pueden ser difíciles de establecer porque contienen menos recursos almacenados y se dañan más fácilmente. Para el cultivo de tejidos como afición, mantener una pequeña cantidad de tejido sano alrededor del meristemo suele proporcionar un equilibrio práctico.
Las plantas diferentes requieren estrategias diferentes
Un método de esterilización que funciona bien para una Monstera puede no funcionar igual de bien para una orquídea o un bulbo de Alocasia.
Los factores que afectan la esterilización incluyen:
- grosor del tejido
- textura de la superficie
- presencia de pelos
- si el tejido creció bajo tierra
- edad del explante
- carga microbiana natural
Los mejores protocolos normalmente se desarrollan mediante pruebas repetidas.
Mantenga registros
Cada vez que establezca una nueva especie, registre el tratamiento exacto.
Nota:
- método de limpieza
- concentración del desinfectante
- tiempo de exposición
- número de enjuagues
- tipo de explante
- supervivencia
- tasa de contaminación
Si la mayoría de los cultivos se contaminan, es posible que el tratamiento deba ser más fuerte.
Si la mayoría de los explantes mueren pero permanecen limpios, es posible que el tratamiento sea demasiado agresivo.
El objetivo no es la esterilización máxima.
El objetivo es la supervivencia limpia máxima.
