Cómo preparar medios de cultivo de tejidos vegetales en casa
El medio de cultivo proporciona a las plantas todo lo que normalmente obtendrían del suelo, las raíces y el entorno que las rodea. Un medio típico contiene nutrientes minerales, vitaminas, azúcar, agua y un agente gelificante. Dependiendo del propósito del cultivo, también puede contener reguladores de crecimiento vegetal. Preparar correctamente los medios es importante porque incluso pequeñas diferencias en la concentración o el pH pueden influir en el desarrollo de las plantas.
Los componentes básicos
Sales basales
Uno de los medios basales más utilizados es el medio Murashige y Skoog, comúnmente llamado medio MS. El MS aporta importantes macronutrientes y micronutrientes, entre ellos nitrógeno, potasio, calcio, magnesio, fósforo, hierro y oligoelementos. Muchas formulaciones comerciales también incluyen vitaminas.
Sacarosa
Las plantas que crecen dentro de recipientes de cultivo a menudo no pueden depender por completo de la fotosíntesis. La sacarosa proporciona una fuente de energía accesible. Una concentración de alrededor de 20–30 g/L es común en muchos protocolos, aunque la concentración ideal varía según la especie y la etapa del cultivo.
Agar
El agar convierte el medio líquido en un gel semisólido. Esto sostiene el explante y, al mismo tiempo, permite que los nutrientes y el agua permanezcan disponibles. La cantidad necesaria depende de la concentración del agar que se utilice.
Reguladores de crecimiento vegetal
Se pueden incluir reguladores de crecimiento vegetal (RGP) como BAP, NAA e IBA para influir en la formación de brotes, la multiplicación o el enraizamiento. Se utilizan en concentraciones muy bajas y deben medirse con precisión.
¿Qué tipo de agua se debe utilizar?
Para obtener resultados consistentes, es preferible utilizar agua destilada, desionizada o de ósmosis inversa. El agua del grifo puede contener cantidades variables de calcio, magnesio, bicarbonato, sodio y otros minerales disueltos. Estos minerales alteran la composición final del medio. El agua del grifo blanda puede funcionar en algunas situaciones, pero el agua purificada proporciona una mejor reproducibilidad.
Preparación del medio
Comience con un poco menos de agua que el volumen final deseado.
- Disuelva completamente las sales basales y la sacarosa.
- Añada cualquier otro componente requerido por la formulación (es decir, RGP y conservantes).
- Ajuste el pH antes de añadir el agar si ese es el método utilizado en su protocolo.
- Se utiliza comúnmente un pH de alrededor de 5,6–5,8 para muchos cultivos de tejidos vegetales.
- Después de ajustar el pH, complete la solución hasta el volumen final.
- Añada el agar necesario y distribuya el medio en los recipientes de cultivo.
- Esterilice en autoclave o olla a presión durante 15 min a 15 PSI y deje enfriar antes de la inoculación.
Esterilización
El medio preparado debe esterilizarse antes de introducir el material vegetal. La autoclave es el método estándar de laboratorio. Para el cultivo de tejidos en casa, se utiliza comúnmente una olla a presión adecuada para lograr condiciones de esterilización por calor húmedo comparables. Después de la esterilización, deje que los recipientes se enfríen sin abrirlos.
Por qué es importante el pH
El pH del medio influye en:
- la disponibilidad de nutrientes
- la consistencia del agar
- la estabilidad química
- el crecimiento de las plantas
Un pH extremadamente alto o bajo puede hacer que algunos nutrientes sean menos disponibles o afectar la forma en que el medio se solidifica.
Evitar errores comunes
Los problemas comunes de preparación incluyen:
- pesaje inexacto
- volumen final incorrecto
- olvidar ajustar el pH
- usar demasiado o muy poco agar
- contaminar el medio después de la esterilización
- confundir mg con g
- añadir RGP concentrados de forma inexacta
Para cantidades muy pequeñas, las soluciones madre pueden facilitar mucho la dosificación precisa.
La consistencia importa más que la perfección
Una gran ventaja del cultivo de tejidos es la repetibilidad. Cuando cada lote se prepara de la misma manera, resulta mucho más fácil determinar si los cambios en el crecimiento de las plantas se deben a la planta en sí o al medio. Por lo tanto, llevar buenos registros es tan valioso como utilizar buenos ingredientes.
