Etablerings-, formerings- og rodningsmedier forklaret
Plantecellekultur udføres sjældent i ét medium fra start til slut. I stedet gennemgår kulturerne ofte flere stadier, som hver især har et forskelligt biologisk formål.
Tre af de vigtigste er etablering, multiplikation og rodskonstruktion. Når man forstår disse stadier, bliver det meget nemmere at styre cellekulturen.
Stadie 1: Etablering
Etableringen begynder, når det oprindelige eksplantat føres ind i en steril kultur.
På dette tidspunkt er de primære mål enkle:
- hold vævet i live
- opnå en kontamineringsfri kultur
- fremmål stabil vækst
- lad eksplantatet komme sig efter steriliseringen
Friske eksplantater har ofte været udsat for betydeligt stress. Blade kan være blevet fjernet, væv skåret, og planten har været udsat for kemisk overfladesterilisering. Af den grund er etableringen ikke nødvendigvis det tidspunkt, hvor man skal maksimere skudmultiplikationen. En vellykket etableringskultur er blot en kultur, der forbliver ren og begynder at producere sund ny vækst.
Stadie 2: Multiplikation
Når en kultur er stabil, ændres målet. I stedet for at vedligeholde ét skud ønsker dyrkeren at producere flere. Multiplikationsmedier indeholder ofte en stærkere cytokinindvirkning. Cytokininer opmuntrer eksisterende knopper til at aktiveres og kan fremme udviklingen af yderligere skud. Når der er udviklet nok skud, kan kulturen opdeles og overføres til frisk multiplikationsmedium. Denne proces kaldes subkultivering. Gentagen subkultivering kan forvandle ét vellykket eksplantat til mange individuelle småplanter.
Hvornår skal kulturer subkultiveres?
Kulturer bør ikke forblive på det samme medium i ubestemt tid.
Over tid:
- forbruges næringsstofferne
- udtømmes sukkeret
- kan agaren tørre ud
- ophobes affaldsprodukter
- fortsætter eksponeringen for væksthormoner
Det ideelle interval afhænger af arten og vækstraten. I stedet for kun at følge kalenderen, så hold øje med planterne. Sunde, aktivt voksende skud er generelt bedre kandidater til subkultivering end svagt eller stresset væv.
Stadie 3: Rodskonstruktion
Et skud, der er produceret under multiplikation, er ikke automatisk klar til at forlade cellekulturen. Det har normalt brug for et funktionelt rodsystem. Under rodskonstruktion ændres hormonbalancen for at fremme rodinitiering og rodforlængelse. Auxiner som IBA bruges ofte til dette formål. Målet er ikke længere at skabe så mange skud som muligt. I stedet er målet at producere en stærk, individuel småplante, der er i stand til at overleve uden for kulturbeholderen.
Hvorfor ikke bruge ét medium til det hele?
Et medium, der producerer fremragende multiplikation, kan hæmme rodskonstruktion. Et medium, der er optimeret til rodskonstruktion, kan producere meget lidt skudmultiplikation. Plantens udvikling ændres afhængigt af næringsstofkoncentrationen, sukkerkoncentrationen og hormonbalancen. Ved at bruge separate stadier kan dyrkeren styre disse udviklingssignaler.
En nyttig måde at tænke på systemet er:
Etablering → Overlev og hold dig ren
Multiplikation → Producer flere skud
Rodskonstruktion → Opbyg en uafhængig plante
Akklimatisering → Tilpas dig normale vækstbetingelser
Denne rækkefølge er en af de grundlæggende idéer bag mikropagering.
