Sådan steriliseres plante-eksplantater til vævskultur

Planteplanten er normalt den største kilde til kontaminering, når en ny vævskultur etableres. Planter har naturligt bakterier, svampesporer og andre mikroorganismer på deres overflader. Formålet med sterilisering af planteplanten er at reducere disse mikroorganismer nok til, at plantevævet kan vokse uden kontaminering. Udfordringen er, at steriliseringsbehandlingen skal dræbe mikroorganismer uden at dræbe planten.

Start med sundt plantemateriale

Steriliseringen begynder, før planteplanten kommer ind i det sterile arbejdsområde. En sund moderplante giver bedre startmateriale end en stresset eller syg plante.

Vælg, når det er muligt:

• aktivt voksende væv
• unge skud
• materiale frit for skadedyr
• materiale uden synlig råd
• væv dyrket væk fra jordkontaminering

Underjordiske strukturer såsom rødder, rhizomer og knoldstængler er generelt sværere at sterilisere.

Rengøring er ikke det samme som sterilisering

Fjern så meget fysisk kontaminering som muligt før kemisk behandling. 

Plantemateriale kan vaskes grundigt med vand og renses for:

• jord
• dødt væv
• organisk affald
• gamle bladskeder

Fjernelse af dette materiale gør det efterfølgende steriliseringsskridt mere effektivt.

Overfladesterilisering

Almindelige steriliseringsmidler i plantevævskulturer inkluderer ethanol og natriumhypochlorit. Ethanol kan hurtigt reducere overfladens mikroorganismer, mens fortyndede natriumhypochloritopløsninger (dvs. klorin) giver en længere desinficerende behandling. Den korrekte styrke og eksponeringstid afhænger i høj grad af planteplanten. Blødt meristemisk væv kan blive beskadiget af en behandling, som en tyk træstængel let tåler. Derfor bør steriliseringsprotokoller betragtes som udgangspunkter snarere end universelle opskrifter.

Steril skylning

Efter kemisk sterilisering overføres planteplanten til det sterile arbejdsområde. Restdesinfektionsmiddel fjernes ved hjælp af sterilt vand. Flere skylninger anvendes ofte for at reducere kemiske rester.

Beskæring efter sterilisering

Planteplantens yderste overflader er normalt mest udsatte for både kontaminanter og steriliseringskemikalier. Når den er kommet ind i det sterile arbejdsområde, kan beskadiget ydervæv fjernes med sterile instrumenter. For skudspidser kan bladskederne fjernes gradvist, indtil renere indre væv blottes. For knuder kan stænglens ender beskæres igen før inokulering.

Planteplantens størrelse betyder noget

Meget store planteplanter kan have mere kontaminering. Ekstremt små planteplanter kan være svære at etablere, fordi de indeholder færre lagrede ressourcer og lettere beskadiges. Til hobbyvævskulturer giver det ofte en praktisk balance at bevare en lille mængde sundt væv omkring meristemet.

Forskellige planter kræver forskellige strategier

En steriliseringsmetode, der fungerer godt til Monstera, fungerer måske ikke lige så godt til en orkidé eller en Alocasia-knold.

Faktorer, der påvirker steriliseringen, inkluderer:

• vævets tykkelse
• overfladestruktur
• tilstedeværelse af hår
• om vævet voksede under jorden
• planteplantens alder
• naturlig mikrobiel belastning

De bedste protokoller udvikles normalt gennem gentagne forsøg.

Før protokol

Når du etablerer en ny art, så nedskriv den nøjagtige behandling.

Bemærk:

• rengøringsmetode
• desinfektionsmiddelkoncentration
• eksponeringstid
• antal skylninger
• planteplantetype
• overlevelse
• kontamineringsrate

Hvis de fleste kulturer bliver kontaminerede, skal behandlingen muligvis gøres stærkere. 

Hvis de fleste planteplanter dør, men forbliver rene, kan behandlingen være for hård.

Målet er ikke maksimal sterilisering.

Målet er maksimal ren overlevelse.